簡(jiǎn)介
微生物在自然界中呈混雜狀態(tài)存在，要獲得所需菌種，必需從中把它們分離出來(lái)。在保存菌種時(shí) 不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多，但基本原理卻是相似的，即將待分離的樣品進(jìn)行一定的稀釋?zhuān)⑹刮⑸锏募?xì)胞（或孢子）盡量以分 散狀態(tài)存在，然后使其長(zhǎng)成一個(gè)個(gè)純種單菌落。然而上述工作又離不開(kāi)接種，即將一種微生物移到另一滅過(guò)菌的培養(yǎng)基上的過(guò)程。
原理
微生物的接種分離和培養(yǎng)是做細(xì)胞代謝分析和體外實(shí)驗(yàn)的基本步驟之一，接種分離的好壞直接影響微生物的培養(yǎng)以及后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果（1）用于細(xì)胞分離（2）細(xì)胞純化（3）細(xì)胞增殖培養(yǎng)。
材料與儀器
大腸桿菌 枯草桿菌 金黃色葡萄球菌 酵母菌 來(lái)蘇爾 石炭酸溶液 福爾馬林 牛肉膏 蛋白胨 恒溫培養(yǎng)箱 接種環(huán) 酒精燈
步驟
1、微生物接種：指將微生物純種或含菌材料轉(zhuǎn)移到另一營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)上的過(guò)程。根據(jù)不同的目的可以采用不同的接種方法，如平板劃線(xiàn)法，涂布法，傾注法等。
2、微生物分離：指依據(jù)微生物的特征，采用各種方法從含菌樣品中獲得由單一個(gè)體（如單一菌體或孢子）或一段菌絲生長(zhǎng)繁殖形成的微生物群體的過(guò)程。常用的分離方法有平板劃線(xiàn)法，稀釋涂布法，平板分離法，稀釋傾注平板分離法和單細(xì)胞分離法。 平板分離法的基本原理包括兩個(gè)方面：
（1）選擇適合于待分離微生物生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、溫度和氧的要求或加入某抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng)的環(huán)境。
（2）微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落可以是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體，因此可以通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。值得指出的是從微生物群體上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落可以并不一定保證是純培養(yǎng)。
3、微生物培養(yǎng)：指微生物被接種到營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)后，在一定條件下生長(zhǎng)繁殖的過(guò)程，分需氧培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。
注意事項(xiàng)
1. 在接種時(shí)，需要在酒精燈旁操作，以維持一個(gè)相對(duì)無(wú)菌的環(huán)境。接種環(huán)與試管口不得任意放在桌上或與其他物品相接觸。
2. 平板或斜面的劃線(xiàn)需要迅速、輕捷，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。
3. 接種完畢后將接種環(huán)抽出，灼燒一下管口，塞上硅膠塞，塞硅膠塞時(shí)請(qǐng)勿用試管口去迎硅膠塞，以免試管在流動(dòng)空氣中納入不潔空氣。
4. 做平板分區(qū)劃線(xiàn)分離時(shí)，劃完一小區(qū)，均勻?qū)⒔臃N環(huán)徹底灼傷滅菌，待冷卻后再劃下一小區(qū)。
5. 所有的培養(yǎng)器皿均需要嚴(yán)格滅菌。
常見(jiàn)問(wèn)題
1. 菌落是由單個(gè)或少數(shù)細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面或里面生長(zhǎng)繁殖所形成的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體。菌落形態(tài)會(huì)因菌種不同或菌種相同但所用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、PH值和時(shí)間等條件不同而存在不同程度的差異。若所用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時(shí)間條件相同，則同一種菌所形成的菌落形態(tài)具有相對(duì)的穩(wěn)定性和統(tǒng)一性。
2. 純培養(yǎng)的確定除了觀(guān)察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征后才能決定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)一系列的分離與純化過(guò)程和多樣性特征鑒定才能確定。
